白藜芦醇对大鼠骨髓内皮祖细胞增殖活性的影响
【出 处】：
【作 者】：余惠珍 陈成 陈俊明 朱鹏立
【摘 要】目的采用密度梯度离心分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞（EPCs）,观察白藜芦醇对EPCs增殖活性的影响。方法首先采用密度梯度离心法分离大鼠骨髓单个核细胞,去除非贴壁细胞,培养14 d后获得EPCs。随后免疫荧光法测定细胞表面血小板-内皮细胞粘附因子（CD31）、血管性血友病因子（vWF）、血管内皮生长因子受体（FLK-1）、白细胞共同抗原（CD45）,行Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白（DiI-AC-LDL）和异硫氰酸荧光素荆豆凝集素-1（FITC-UEA-1）双摄取实验,以及基质胶（Matrigel）管状形成实验,鉴定EPCs。运用CCK8法检测细胞增殖活性,采用不同浓度（5、10、25、50、100μmol/L）白藜芦醇干预EPCs 48 h,以及白藜芦醇在不同时间（24～72 h）干预EPCs,分别检测细胞增殖活性。结果大鼠骨髓单个核细胞分离后,经诱导培养14 d后,呈现"鹅卵石样""铺路石状"外观。超过90%细胞表面表达CD31、vWF、FLK-1,能摄取DiI-AC-LDL和结合FITC-UEA-1,可在Matrigel胶中形成管状结构,经上述方法证实,本实验所分离培养的细胞为大鼠EPCs。与对照组比较,干预48 h,白藜芦醇呈浓度依赖性（5～50μmol/L）增强EPCs增殖活性（P均<0.01）。50μmol/L白藜芦醇干预EPCs 24 h～72 h后,EPCs的增殖活性呈现时间依赖性增强。结论采用密度梯度离心法分离培养及免疫荧光法鉴定细胞,证实为大鼠骨髓内皮祖细胞;进一步证实白藜芦醇可增强内皮祖细胞的增殖活性,为后续研究白藜芦醇的心血管保护机制奠定实验基础。
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